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兔外周血單個核細胞分離液試劑盒說明書

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：

【實驗前準備】

A． 適用儀器

zui大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機

B． 耗材

全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。

首先取抗凝血按體積比 1:1 的比例加入樣本稀釋液（產(chǎn)品編號：2010C1119）混勻，根

據(jù)稀釋后的樣本量大小，分以下兩種情況：

情況 A：稀釋后的血液樣本量小于 5ml 時，實驗方法如下：

1. 取一支 15ml 離心管，先加入與稀釋后樣本等量的分離液（注：分離液zui少不得少于 3ml）。

1. 用吸管小心吸取稀釋后的血液樣本加于分離液液面上，400-500g ，離心 20-30min（注： 根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離 心條件需客戶自行摸索，以達到分離效果）。

1. 離心后，此時離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色單個 核細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。

1. 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個核細胞層到另一 15ml 離心管中，在離心管中加 入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細胞。

1. 250g，離心 10min。

1. 棄上清。

1. 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細胞。

1. 250g，離心 10min。

1. 重復(fù) 6、7、8，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞。

情況 B：稀釋后的血液樣本量大于等于 5ml 時，實驗方法如下：

1. 取一支適當?shù)碾x心管，先加入與稀釋后樣本等量的分離液。

1. 將經(jīng)稀釋后的血液樣本小心加于分離液之液面上，500-650g（zui大離心力可至 1000g）， 離心 20-30min。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液量越多，離心力越大，離心 時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到分離效果。加入血液樣本后，樣 本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二）。

1. 剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 至步驟 9。

【注意事項】

1. 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得的實驗結(jié)果，zui 好在取血 2h 內(nèi)進行實驗，血液存放時間越長，細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后 分離效果更差甚至不能達到分離目的。

1. 本實驗不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離 心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導(dǎo)致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面 會變成毛面，影響細胞分離效果。

1. 吸取過多的單個核細胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的

粒細胞數(shù)量增加。

1. 吸取過多的單個核細胞層上層溶液會導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。

1. 分離液用量大于稀釋后血液樣本時，分離效果更佳。

1. 如實驗后細胞得率或活性過低，請以尋求幫助，具體詳 見下方生產(chǎn)企業(yè)信息。

【儲存條件及有效期】

18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟

封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

【參考值（參考范圍）】

本實驗單個核細胞提取率及純度均大于 80%。

下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例，用戶可適當進行參考。

【相關(guān)實驗技術(shù)方案】

1. 所獲得單個核細胞的培養(yǎng)技術(shù)。

1. 所獲得單個核細胞的核酸提取技術(shù)。

1. 所獲得單個核細胞的鑒定方法 A.流式細胞技術(shù) B.免疫組化技術(shù)

C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

注：上述技術(shù)方案詳情請登陸本搜索“細胞分離、

純化、擴增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊”，并在說明書項目欄下下載使用。

【可能存在的問題及解決方法】

1.    由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

1. 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地 區(qū)客戶可根據(jù)當?shù)厍闆r對離心條件進行適當調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時，恒定離 心時間，對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整。

1. 本分離液依照標準，全部使用藥用級原料，性能指標與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可

能出現(xiàn)紅細胞沉降不*的情況，可以適當加大離心轉(zhuǎn)速。

注：在對離心條件進行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達到分離效果，

離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。